Survey of cytokines on ocular surfaces of atopic dogs by multiplex analysis using two sampling methods – a pilot study. Issue 6 (12th August 2021) - Pressanti, Charline
Abstract : Background: Conjunctivitis in atopic dogs has already been described yet is rarely observed, and likely underdiagnosed in practice. Objectives: To assay various cytokines in tears and conjunctivae from atopic and normal dogs, and to compare canine atopic dermatitis‐associated conjunctivitis with controls. Animals: Ten atopic and ten normal client‐owned dogs. Methods and materials: Ocular surfaces were sampled bilaterally in a prospective study, using two different methods. Tear samples were obtained with a sterile swab previously moistened with saline solution (method A). Conjunctival impressions were obtained with a conjunctival impression device (method B). For each sample, the concentrations of a panel of 13 cytokines were measured by multiplex analyses. CADESI‐4, pruritus (PS) and conjunctival (CS) scores were determined. Results: Among the measured cytokines, only granulocyte‐macrophage colony‐stimulating factor (GM‐CSF), keratinocyte‐derived chemokine (KC)‐like and interleukin (IL)‐8 were above the limit of quantification in most samples. Absolute amounts of each cytokine were always higher in samples obtained with method A than with method B. GM‐CSF amounts were lower in atopic dogs (method A, P=0.02; method B, P=0.0005). KC levels were higher in atopic dogs, yet the differences were not significant. IL‐8 amounts were higher in atopic dogs (method A, P=0.0003; method B, P=0.006). Conclusions and clinical relevance: Regardless of the method, these preliminary results suggest an overexpression of IL‐8 in conjunctivae and tears of atopic dogs despite subtle conjunctival symptoms. As IL‐8 is commonly found in many inflammatory conditions, further studies are needed to determine its specificity in atopic conjunctivitis. Abstract : Background – Conjunctivitis in atopic dogs has already been described yet is rarely observed, and likely underdiagnosed, in practice. Objectives – To assay various cytokines in tears and conjunctivae from atopic and normal dogs, and to compare canine atopic dermatitis‐associated conjunctivitis with controls. Conclusions and clinical relevance – Regardless of the method, these preliminary results suggest an overexpression of IL‐8 in conjunctivae and tears of atopic dogs despite subtle conjunctival symptoms. As IL‐8 is commonly found in many inflammatory conditions, further studies are needed to determine its specificity in atopic conjunctivitis. Résumé: Contexte: La conjonctivite du chien atopique a déjà été décrite comme rarement observée et sans doute sous diagnostiqué en pratique. Objectifs: Evaluer différentes cytokines dans les larmes et les conjonctives de chiens sains et atopiques et comparer aux conjonctivites associées à la dermatite atopique avec contrôles. Sujets: Dix chiens atopiques et dix chiens sains de propriétaires. Matériels et méthodes: Les surfaces oculaires des deux yeux ont été prélevées en prospectif à l'aide de deux méthodes différentes. Les échantillons de larmes ont été obtenus avec des écouvillons stériles préalablement humidifiés avec solution saline (méthode A). Des impressions de conjonctive ont été obtenues par impression conjonctivale (méthode B). Pour chaque échantillon, les concentrations d'un panel de 13 cytokines ont été mesurées par analyses multiplexes. Le CADESI‐04, les scores de prurit (PS) et de conjonctive (CS) ont été évalués. Résultats: Parmi les cytokines mesurées, seules GM‐CSF (granulocyte‐macrophage colony‐stimulating factor), KC (keratinocyte‐derived chemokine)‐like et interleukine (IL)‐8 étaient au dessus des limites de quantification de la plu spart des échantillons. Les quantités absolues de chaque cytokine étaient toujours plus élevées dans les échantillons obtenus par la méthode A que par la méthode B. Les quantités de GM‐CSF étaient plus faibles chez les chiens atopiques bien que la différence ne soit pas significative. Les quantités d'IL‐8 étaient plus élevées chez les chiens atopiques (méthode A, P=0.0003; méthode B, P=0.006). Conclusions et importance clinique: Sans parler de la méthode, ces résultats préliminaires suggèrent une surexpression d'IL‐8 dans la conjonctive et les larmes des chiens atopiques malgré les subtils symptômes conjonctivaux. Comme IL‐8 est fréquemment retrouvée dans de nombreuses atteintes inflamamtoires, d'autres études sont necessaire spour déterminer sa spécificité dans les conjonctivites atopiques. Resumen: Introducción: la conjuntivitis en perros atópicos ya ha sido descrita, pero aun así rara vez se observa y probablemente se infradiagnostica en la práctica Objetivos: analizar varias citoquinas en lágrimas y conjuntivas de perros atópicos y normales, y comparar la conjuntivitis asociada a dermatitis atópica canina con controles. Animales: diez perros atópicos y diez perros normales de propietarios particulares. Métodos y materiales: se tomaron muestras de forma bilateral de las superficies oculares en un estudio prospectivo, utilizando dos métodos diferentes. Las muestras de lágrimas se obtuvieron con un hisopo estéril previamente humedecido con solución salina (método A). Las impresiones conjuntivales se obtuvieron con un dispositivo de impresión conjuntival (método B). Para cada muestra, se midieron las concentraciones de un panel de 13 citoquinas mediante análisis multiplex. Se determinaron las puntuaciones CADESI‐4, prurito (PS) y conjuntival (CS). Resultados: entre las citoquinas valoradas, solo el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM‐CSF), quimioquinas similares a las derivadas de queratinocitos (KC) e interleuquina (IL) ‐8 estuvieron por encima del límite de cuantificación en la mayoría de las muestras. Las cantidades absolutas de cada citoquina fueron siempre mayores en las muestras obtenidas con el método A que con el método B. Las cantidades de GM‐CSF fueron menores en perros atópicos (método A, P = 0, 02; método B, P = 0, 0005). Los niveles de KC fueron más altos en los perros atópicos, pero las diferencias no fueron significativas. Las cantidades de IL‐8 fueron mayores en perros atópicos (método A, P = 0, 0003; método B, P = 0, 006). Conclusiones y relevancia clínica: Independientemente del método, estos resultados preliminares sugieren una sobreexpresión de IL‐8 en conjuntivas y lágrimas de perros atópicos a pesar de signos clínicos conjuntivales sutiles. Como la IL‐8 se encuentra comúnmente en muchas afecciones inflamatorias, se necesitan más estudios para determinar su especificidad en la conjuntivitis atópica. Zusammenfassung: Hintergrund: Eine Konjunktivitis bei atopischen Hunden wurde bereits beschrieben, wird aber selten beobachtet und es besteht die Vermutung, dass sie in der Praxis selten diagnostiziert wird. Ziele: Verschiedene Zytokine sollten in Tränen und in der Konjunktiva mittels Assays bei atopischen und normalen Hunden untersucht werden und ein Vergleich der Konjunktivitis im Zusammenhang mit caniner atopischer Dermatitis und Kontrolltieren durchgeführt werden. Tiere: Zehn atopische und zehn normale Hunde in Privatbesitz. Methoden und Materialien: Es wurden bilateral von okulären Oberflächen Proben für eine prospektive Studie entnommen, wobei zwei Methoden zum Einsatz kamen. Es wurden Tränenproben mit sterilen Tupfern, die zuvor mit einer Kochsalzlösung befeuchtet worden waren, genommen (Methode A). Außerdem wurden Impressionen der Bindehaut mit einem konjunktivalen Impressionsgerät (Methode B) genommen. Für jede Probe wurden die Konzentrationen eines Panels von 13 Zytokinen mittels Multiplex Analyse gemessen. CADESI‐4, Pruritus (PS) und Konjunktiva Auswertungen (CS) wurden festgehalten. Ergebnisse: Von den gemessenen Zytokinen lagen bei den meisten Proben nur der Granulozyten‐Makrophagen Kolonie‐stimulierende Faktor (GM‐CSF), der Keratinozyten‐derived Chemokine (KC)‐like Faktor und Interleukin (IL)‐8 über der Messgrenze. Absolutwerte eines jeden Zytokins lagen in Proben, die mit Methode A gewonnen worden waren, immer höher als bei jenen, die mit Methode B gewonnen worden waren. GM‐CSF Werte waren bei atopischen Hunden niedriger (Methode A, P = 0, 02; Methode B, P = 0, 0005). KC Werte waren bei atopischen Hunden höher, aber die Unterschiede waren nicht signifikant. IL‐8 Werte waren bei atopischen Hunden höher (Methode A, P = 0, 0003; Methode B, P = 0, 006). Schlussfolgerungen und klinische Bedeutung: Diese vorläufigen Ergebnisse weisen darauf hin ‐ egal welche Methode angewendet wurde – dass trotz geringer konjunktivaler Symptome eine Überexprimierung von IL‐8 in Konjunktiva und Tränen von atopischen Hunden vorkommt. Da IL‐8 häufig bei entzündlichen Erkrankungen auftritt, sind weitere Studien nötig, um seine Spezifität bei der atopischen Konjunktivitis zu bestimmen. 要約: 背景: アトピー犬に発症する結膜炎はすでに説明されているが、実際にはほとんど観察されず、おそらく過小診断されている。 目的: 本研究の目的は、アトピーおよび健常犬の涙液および結膜のさまざまなサイトカインを解析し、犬アトピー性皮膚炎に関連する結膜炎を対照と比較することであった。 被験動物: 10頭のアトピー犬および10頭のオーナー所有の健常犬。 材料と方法: 前向き研究では、2つの異なる方法を用いて、両眼の表面からサンプリングした。涙液サンプルは、あらかじめ生理食塩水で湿らせた滅菌綿棒で採取した (方法A) 。結膜インプレッションは、結膜インプレッション装置 (方法B) で得られた。各サンプルについて、13種類のサイトカインパネル濃度を多重分析によって測定した。 CADESI‐4、掻痒(PS) および結膜 (CS) スコアを測定した。 結果: 測定されたサイトカインのうち、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 (GM‐CSF) 、ケラチノサイト由来ケモカイン (KC) 様、およびインターロイキン (IL)‐8のみが、ほとんどのサンプルで定量限界を超えていた。各サイトカインの絶対量は、方法Bよりも方法Aで得られたサンプルで常に高かった。GM‐CSF量はアトピー犬で低かった (方法A、P = 0.02;方法B、P = 0.0005) 。 KCレベルはアトピー犬の方が高かったが、その差は有意ではなかった。 IL‐8量は、アトピー犬の方が高かった (方法A、P = 0.0003;方法B、P = 0.006) 。 結論と臨床的関連性: 方法に関係なく、これらの予備的な結果は、微妙な結膜症状にもかかわらず、結膜およびアトピー犬の涙液におけるIL‐8の過剰発現を示唆している。 IL‐8は多くの炎症状態で一般的に見られるため、アトピー性結膜炎におけるその特異性を決定するには、さらなる研究が必要である。 摘要: 背景: 已经描述了特应性犬中的结膜炎, 但在临床中很少观察到, 并且可能诊断不足。 目的 测定特应性和正常犬泪液和结膜中的各种细胞因子, 并将犬特应性皮炎相关结膜炎与对照组进行比较。 动物 10只特应性和10只正常客户拥有的犬。 方法和材料: 在一项前瞻性研究中, 使用两种不同的方法对眼表进行双侧采样。用预先用生理盐水溶液润湿的无菌拭子获得泪液样本 (方法a) 。用结膜按压工具获得结膜压片 (方法B) 。对于每份样本, 通过多重分析测量一组13种细胞因子的浓度。测定CADESI‐4、瘙痒(PS)和结膜(CS)评分。 结果: 在测量的细胞因子中, 只有粒细胞‐巨噬细胞集落刺激因子(GM‐CSF)、角质形成细胞衍生趋化因子(KC)样和白介素(IL)‐8在大多数样本中高于定量限。用方法A获得的样本中, 每种细胞因子的绝对量始终高于方法B。特应性犬中GM‐CSF的量较低 (方法A, P = 0.02; 方法B, P = 0.0005) 。特应性犬的KC水平较高, 但差异不显著。特应性犬的IL‐8量较高 (方法A, P = 0.0003; 方法B, P = 0.006) 。 结论和临床相关性: 无论采用何种方法, 这些初步结果表明尽管存在细微的结膜症状, 但特应性犬的结膜和泪液中IL‐8过度表达。由于IL‐8常见于许多炎性疾病, 因此需要进一步的研究来确定其在特应性结膜炎中的特异性。 Resumo: Contexto: A conjuntivite em cães atópicos já foi descrita, mas raramente é observada e é provavelmente subdiagnosticada na prática. Objetivos: Testar várias citocinas em lágrimas e conjuntiva de cães atópicos e normais e comparar a conjuntivite associada à dermatite atópica canina com controles. Animais: Dez cães atópicos e dez cães normais de clientes. Métodos e materiais: As superfícies oculares foram amostradas bilateralmente em um estudo prospectivo utilizando dois métodos diferentes. As amostras de lágrimas foram obtidas com um swab estéril previamente umedecido com solução salina (método A). As impressões conjuntivais foram obtidas com um dispositivo de impressão conjuntival (método B). Para cada amostra, as concentrações de um painel de 13 citocinas foram medidas por análise multiplex. Foram determinados os escores CADESI‐4, prurido (PS) e conjuntival (CS). Resultados: Entre as citocinas medidas, apenas o fator estimulador de colônias de granulócitos‐macrófagos (GM‐CSF), quimiocinas derivadas de queratinócitos (KC) e interleucina (IL) ‐8 estavam acima do limite de quantificação na maioria das amostras. As quantidades absolutas de cada citocina foram sempre maiores nas amostras obtidas com o método A do que com o método B. As quantidades de GM‐CSF foram menores em cães atópicos (método A, P = 0, 02; método B, P = 0, 0005). Os níveis de KC foram maiores em cães atópicos, mas as diferenças não foram significativas. As quantidades de IL‐8 foram maiores em cães atópicos (método A, P = 0, 0003; método B, P = 0, 006). Conclusões e relevância clínica: Independentemente do método, esses resultados preliminares sugerem uma superexpressão de IL‐8 na conjuntiva e lágrimas de cães atópicos, apesar dos sintomas conjuntivais sutis. Como a IL‐8 é comumente encontrada em muitas condições inflamatórias, mais estudos são necessários para determinar sua especificidade na conjuntivite atópica.