Superaufgelöste Erkennung räumlicher Nähe mit Proximity‐PAINT. (9th November 2020) - Schueder, Florian; Lara‐Gutiérrez, Juanita; Haas, Daniel; Beckwith, Kai Sandvold; Yin, Peng; Ellenberg, Jan; Jungmann, Ralf
Abstract: Die Visualisierung funktionaler Interaktionen von Biomolekülen wie Proteinen und Nukleinsäuren ist der Schlüssel zum Verständnis zellulären Lebens auf molekularer Ebene. Räumliche Nähe wird oft stellvertretend für die direkte Interaktion von Biomolekülen angesehen. Aktuelle Techniken zur Visualisierung räumlicher Nähe sind jedoch entweder durch die erreichbare Auflösung, den dynamischen Bereich oder einen Mangel an Einzelmolekülsensitivität begrenzt. Wir haben Proximity‐PAINT (pPAINT) entwickelt, eine Variante des superauflösenden Mikroskopieverfahrens DNA‐PAINT. pPAINT verwendet eine geteilte DNA‐PAINT‐Bindestelle, um räumliche Nähe mit hoher Empfindlichkeit, wenig Fehlern und präzise einstellbaren Detektionsabständen zu erkennen. Wir testen und optimieren pPAINT mit Hilfe von DNA‐Nanostrukturen und demonstrieren die zelluläre Anwendbarkeit, indem wir die räumliche Nähe von Alpha‐ und Beta‐Tubulin in Mikrotubuli in Zellen superaufgelöst visualisieren. Abstract : Modifizierte DNA‐PAINT‐Mikroskopie wird verwendet, um die räumliche Nähe von Biomolekülen mit Superauflösung abzubilden. Die neue Technik – Proximity‐PAINT – zeichnet sich durch einen präzise einstellbaren Detektionsbereich, hohe Empfindlichkeit und niedrige Falsch‐Positiv‐Raten aus. Die Implementierung kann zur Visualisierung von zellulären Protein‐Protein‐Interaktionen und anderen Biomolekülen von Interesse eingesetzt werden.